Resistencia de cepas de Staphylococcus aureus aislados en ambientes nosocomiales / Resistance of Staphylococcus aureus strains isolated in nosocomial environments / Resistência de cepas de Staphylococcus aureus isoladas em ambientes nosocomiais

Staphylococcus aureus es un microorganismo que posee características particulares de virulencia y resistencia a los antibióticos. Las infecciones que produce, ocurren mayormente en personas inmunodeprimidas que podrían presentar severas consecuencias, a pesar de la terapia antimicrobiana. Objetivo. Determinar la resistencia de Staphylococcus aureus aislados en ambientes nosocomiales mediante métodos convencionales y moleculares. Materiales y métodos. el estudio presenta un enfoque cuantitativo, investigación de campo, observacional de corte transversal. Se analizó 200 muestras de aislados de ambientes nosocomiales mediante métodos fenotípicos (antibiograma por la técnica de Kirby Bauer) y genotípicos (genes de resistencia blaZ, mecA, y vanA por PCR punto final). Resultados. Los resultados de las pruebas de susceptibilidad antibiótica mostraron que el 100% de las cepas de S. aureus aisladas, fueron resistentes a oxacilina y penicilina g; y sensibles a vancomicina. Conclusiones. los resultados obtenidos en este estudio evidenciaron la presencia de SARM en las diferentes áreas hospitalarias, constituyéndose en un factor de riesgo de transmisión horizontal entre el personal sanitario y los pacientes, razón por la cual es de gran importancia evaluar su prevalencia y establecer medidas rigurosas de prevención y control de su diseminación, para disminuir el riesgo de nuevas infecciones.

Staphylococcus aureus is a microorganism with particular characteristics of virulence and resistance to antibiotics. The infections it produces occur mostly in immunocompromised individuals who may present severe consequences, despite antimicrobial therapy. Objective. To determine the resistance of Staphylococcus aureus isolated in nosocomial environments by conventional and molecular methods. Materials and methods. The study presents a quantitative, field research, observational, cross-sectional approach. Two hundred samples of isolates from nosocomial environments were analyzed by phenotypic (antibiogram by Kirby Bauer technique) and genotypic (resistance genes blaZ, mecA, and vanA by endpoint PCR) methods. Results. The results of the antibiotic susceptibility tests showed that 100% of the S. aureus strains isolated were resistant to oxacillin and penicillin g; and sensitive to vancomycin. Conclusions. the results obtained in this study showed the presence of MRSA in the different hospital areas, constituting a risk factor for horizontal transmission between health personnel and patients, which is why it is of great importance to evaluate its prevalence and establish rigorous measures for the prevention and control of its dissemination, in order to reduce the risk of new infections.

O Staphylococcus aureus é um microorganismo com características particulares de virulência e resistência a antibióticos. As infecções ocorrem principalmente em indivíduos imunocomprometidos que podem ter conseqüências graves, apesar da terapia antimicrobiana. Objetivo. Para determinar a resistência de Staphylococcus aureus isolado em ambientes nosocomiais usando métodos convencionais e moleculares. Materiais e métodos. O estudo apresenta uma abordagem quantitativa, pesquisa de campo, observacional, transversal. Duzentas amostras de isolados de ambientes nosocomiais foram analisadas pelos métodos fenotípico (antibiograma pela técnica de Kirby Bauer) e genotípico (genes de resistência blaZ, mecA, e vanA pelo método de PCR de ponto final). Resultados. Os resultados dos testes de suscetibilidade aos antibióticos mostraram que 100% das cepas de S. aureus isoladas eram resistentes à oxacilina e penicilina g; e sensíveis à vancomicina. Conclusões. Os resultados obtidos neste estudo mostraram a presença de MRSA nas diferentes áreas hospitalares, constituindo um fator de risco para a transmissão horizontal entre o pessoal de saúde e os pacientes, razão pela qual é de grande importância avaliar sua prevalência e estabelecer medidas rigorosas para a prevenção e controle de sua disseminação, a fim de reduzir o risco de novas infecções.

Vigilancia epidemiológica de Staphylococcus aureus y resistencia antibiótica en ambientes nosocomiales / Epidemiological surveillance of Staphylococcus aureus and the antibiotic resistence in nosocomial environments / Vigilância epidemiológica de Staphylococcus aureus e resistência a antibióticos em ambientes nosocomiais

Uno de los microrganismos más importantes en Infecciones Asociadas a la Atención en Salud (IAAS) es Staphylococcus aureus, una bacteria aerobia Gram positiva, resistente a diferentes condiciones ambientales. Objetivo. Identificar Staphylococcus aureus y su resistencia a los principales antibióticos Betalactámicos, aislada en áreas inertes. Materiales y métodos. Se realizó análisis fenotípico, antibiograma y métodos moleculares como: Extracción de ADN mediante Lisis Alcalina, identificación molecular para la amplificación de los genes tanto de identificación de la bacteria (nucA y femB), como de resistencia de antibióticos (blaZ, mecA y vanA) mediante PCR punto final, la separación de los amplicones se realizó mediante electroforesis en gel de Agarosa, los productos de la PCR se revelaron mediante la utilización de transiluminador UV. Resultados. De 200 muestras tomadas se obtuvo dos muestras positivas (1%) para Staphylococcus aureus, con el 100% de resistencia a penicilina y sensible a todos los demás antibióticos testeados. Conclusiones. La identificación de la bacteria y su resistencia hoy en día se realiza mayormente mediante métodos moleculares, lo cual no descarta la identificación fenotípica que, en este caso, determinó resultados importantes como lo es la prueba D-test positivo. La resistencia a fármacos betalactámicos se considera como un serio problema de salud, por lo tanto, se requiere de una vigilancia epidemiológica constante.

Staphylococcus aureus is one of the most important microorganisms related to Health Care Associated Infections (HCAI), it is a Gram-positive aerobic bacterium, highly resistant to the outer environment. Objective. Identify Staphylococcus aureus and its resistance to the most common beta-lactam antibiotics in isolated, inert areas. Materials and methods. Phenotypic analysis, antibiogram and molecular testing such as: DNA extraction by Alkaline Lysis, molecular identification for the amplification of genes both for identification of Staphylococcus aureus (nucA and femB), and for antibiotic resistance (blah, mega and vanA) by PCR, the disassociation of the amplicons was preforming by Agarose gel electrophoresis and results were shown in a UV translluminator. Results. From the 200 samples taken, two showed positive (1%) for Staphylococcus aureus, with 100% penicillin-resistant and sensitive to all other antibiotics tested. Conclusions. Nowadays identification of the bacteria and its resistance is carried out mostly through molecular testing, ruling out phenotypic identification, which in this case it determined important results such as the positive D-test. Resistance to beta-lactam drugs is considered a serious health issue, therefore it requires a safer epidemiological vigilance, an increase in sensitivity testing and the accuracy of results. It is recommended to carry out the D-test in laboratories to identify resistance mechanisms and to guide health personnel to select the best option regarding specific and effective treatment for patients affected with MRSA.

Um dos microrganismos mais importantes em Infecções Associadas à Saúde (HAIs) é o Staphylococcus aureus, uma bactéria aeróbica gram-positiva resistente a diferentes condições ambientais. Objetivo. Identificar Staphylococcus aureus e sua resistência aos principais antibióticos beta-lactam, isolados em áreas inertes. Materiais e métodos. Análise fenotípica, antibiograma e métodos moleculares foram realizados tais como: extração de DNA por Alkaline Lysis, identificação molecular para a amplificação dos genes tanto da identificação da bactéria (nucA e femB), e resistência a antibióticos (blaZ, mecA e vanA) pelo ponto final da PCR, a separação dos amplicons foi realizada por eletrofose em gel de Agarose, os produtos PCR foram revelados usando transiluminador UV. Resultados. De 200 amostras colhidas, duas amostras positivas (1%) foram obtidas para o Staphylococcus aureus, com 100% de resistência à penicilina e sensível a todos os outros antibióticos testados. Conclusões. A identificação da bactéria e sua resistência hoje é realizada principalmente por métodos moleculares, o que não exclui a identificação fenotípica que, neste caso, determinou resultados importantes como o teste D positivo. A resistência aos medicamentos beta-lactam é considerada um grave problema de saúde, portanto, é necessária uma vigilância epidemiológica constante.

Susceptibilidad de cepas de S. aureus aisladas en superficies hospitalarias

Resumen Las infecciones nosocomiales por Staphylococcus aureus tiene una alta prevalencia, debido a que esta bacteria forma parte de la microbiota de la piel del personal de salud y pacientes. Este microorganismo debido a su ubicuidad está presente en superficies y fómites, convirtiéndose en vectores para la trasmisión de infecciones. Objetivo. Describir el perfil de susceptibilidad antibiótica de cepas de S. aureus aisladas en superficies de un hospital de la ciudad de Cuenca. Materiales y métodos . Se realizó un estudio con enfoque cuantitativo, de corte transversal, descriptivo. Se recolectaron 200 muestras de diferentes superficies de áreas hospitalarias, en las que se identificó S. aureus mediante la amplificación de genes nucA Y femB. La susceptibilidad fenotípica a los antibióticos se determinó por el método de Kirby Bauer. Resultados . Se identificaron 6 cepas de S. aureus distribuidas de la siguiente manera: 2 cepas en el área de emergencia (33.33%) y 1 cepa (16.66%) en cada una de las áreas de: vestidores, rayos X, ecografía y odontología. La totalidad de estos aislados resultaron resistentes a: penicilina, oxacilina y amoxacilina; sensibles a trimetoprim sulfametoxazol, rifampicina, tetraciclina, cloranfenicol, vancomicina y linezolid. En el caso de la gentamicina se encontró: 3 cepas sensibles, 1 con sensibilidad intermedia y 2 resistentes. Conclusión . Se aislaron 6 cepas de S. aurues, en las cuales se pudo medir la susceptibilidad a diferentes antibióticos.

Abstract Nasocomial infections by Staphylococcus aureus have a high prevalence, because this bacterium is part of skin microbiota of health personnel and patients. This microorganism for its ubiquity is present on surfaces and fomites becoming vectors for the transmission of infecions. Objective . Describe the antibiotic sisceptibility profile of S. aureus strains isolated from surfaces of hospital the city of Cuenca. Materials and methods . Is a quantitative cross sectional, descriptive, 200 samples were collected from different surfaces of hospital areas, in which S. aureus was identified through the amplification of nucA and femB genes. Phenotipic susceptibility to antibiotics was determined by the Kirby Bauer method. Results. 6 strains of S. aureus were identified, distributes as follows: 2 strains in the emergency area (33.33%) and 1 (16.66%) in each of the areas: dressing rooms X-rays, ultrasound and dentistry. All of these isolates were resistant to: penicillin, oxacillin, and amoxacillin; sensitive to trimethoprim sulfamethoxazole, rifampin, tetracycline vancomycin and linezolid. In the case of gentamicin, it was found: 3 sensitive strains, 1 with intermediate sensitivity and 2 resistant. Conclusion. Six strains of S. aureus were isolates, in which the susceptibility to different antibiotics could be measured.

Resumo As infecções nosocomiais por Staphylococcus aureus têm uma elevada prevalência, devido ao facto desta bactéria fazer parte da microbiota cutânea do pessoal de saúde e dos pacientes. Devido à sua ubiquidade, este microorganismo está presente nas superfícies e fomenta, tornando-se um vector de transmissão de infecções. Objectivo . Descrever o perfil de susceptibilidade aos antibióticos das estirpes de S. aureus isoladas das superfícies de um hospital na cidade de Cuenca. Materiais e métodos. Foi realizado um estudo quantitativo, transversal e descritivo. Duzentas amostras foram recolhidas em diferentes superfícies de áreas hospitalares, nas quais S. aureus foi identificado por amplificação dos genes nucA e femB. A susceptibilidade fenotípica aos antibióticos foi determinada pelo método de Kirby Bauer. Resultados. Foram identificadas seis estirpes de S. aureus, distribuídas da seguinte forma: duas estirpes na área de emergência (33,33%) e uma estirpe (16,66%) em cada uma das seguintes áreas: camarins, raio-x, ultra-som e odontologia. Todos estes isolados eram resistentes à penicilina, oxacilina e amoxacilina; sensíveis ao trimetoprim sulfametoxazol, rifampicina, tetraciclina, cloranfenicol, vancomicina e linezolida. No caso da gentamicina encontramos: 3 estirpes sensíveis, 1 com sensibilidade intermédia e 2 resistentes. Conclusão . 6 estirpes de S. aurues foram isoladas, nas quais a susceptibilidade a diferentes antibióticos podia ser medida.

Sensibilidad y especificidad de pruebas moleculares en odontología / Sensitivity and specificity of molecular tests in dentistry

La biología molecular tiene mayor afinidad en las áreas de la salud, en odontología su principal aplicación ha sido en la identificación de microorganismos orales patógenos mediante el uso de secuencias genéticas específicas (ácido desoxirribonucleico [DNA], ácido ribonucleico [RNA] y proteínas). Las pruebas a nivel molecular se caracterizan por su rapidez, reproductibilidad, sensibilidad y especificidad de los microorganismos diana. El presente artículo de revisión bibliográfica servirá como herramienta para comprender los principios de las técnicas más destacadas como son: PCR estándar y RT-PCR en tiempo real, PCR con transcriptasa inversa, microarreglos y ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA), además de sus ventajas y desventajas respecto a las pruebas convencionales (AU)

Molecular biology has a greater affinity in the areas of health. In dentistry, its main application has been the identification of pathogenic oral microorganisms, through the use of specific genetic sequences (deoxyribonucleic acid [DNA], ribonucleic acid [RNA] and proteins). Molecular tests are characterized by their rapidity, reproducibility, sensitivity and specificity of target microorganisms. This literature review article will serve as a tool to understand the principles of the most prominent techniques such as: Standard PCR, Real-time RT-PCR, Reverse transcriptase PCR, microarrays and Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), in addition to their advantages and disadvantages with respect to conventional tests (AU)

Detección de mutaciones del gen 23S de Helicobacter pylori implicadas en la resistencia a claritromicina / Detection of Helicobacter pylori 23S gene involved in clarithromycin resistance / Detecção de mutações no gene 23S do Helicobacter pylori envolvidas na resistência à claritromicina

INTRODUCCIÓN: uno de los principales factores que influyen en el tratamiento para la erradicación de Helicobacter pylori es la resistencia a antibióticos, la cual difiere entre países e incluso regiones de un país. Entre los antibióticos más usados para el tratamiento de la infección se encuentra la claritromicina, se ha demostrado que el gen 23S ARNr está involucrado en la resistencia a este antibiótico, como resultado de mutaciones puntuales. OBJETIVO: detectar las mutaciones presentes en el gen 23S ARNr que codifican la resistencia a la claritromicina en Helicobacter pylori a través de un método no invasivo y rápido. MATERIALES Y MÉTODOS: a partir de muestras de heces de 76 pacientes con síntomas gastrointestinales asociados a la bacteria, se aisló y purificó el ADN bacteriano, se identificó el gen 23S ARNr mediante seminested PCR. Para la detección de mutaciones puntuales en el gen se realizó la RFLP, utilizando las enzimas HhaI que detecta la mutación T2717C y MboII que identifica la mutación A2142C/G. RESULTADOS: un total de 45 pacientes resultaron positivos a Helicobacter pylori lo cual corresponde al 59,2%. La mutación T2717C analizada con la enzima HhaI se presentó en el 2,2% de la muestra de estudio, no se obtuvo resultados positivos para la enzima MboII. CONCLUSIONES: a través de la Seminested PCR se identificó al gen 23S ARNr de Helicobacter pylori, PCR-RFLP es un método fiable para detectar la presencia de mutaciones causantes de resistencias a antibióticos, útil antes de elegir el tratamiento erradicador contra las infecciones por Helicobacter pylori.

INTRODUCTION: one of the main factors that influence the treatment for the eradication of Helicobacter pylori is resistance to antibiotics, which differs between countries and even regions of a country. Clarithromycin is among the most widely used antibiotics for the treatment of infection. The 23S rRNA gene has been shown to be involved in resistance to this antibiotic, as a result of point mutations. OBJECTIVE: to detect the mutations present in the 23S rRNA gene that encode resistance to clarithromycin in Helicobacter pylori through a non-invasive and rapid method. MATERIALS AND METHODS: from stool samples of 76 patients with gastrointestinal symptoms associated with the bacteria, bacterial DNA was isolated and purified, the 23S rRNA gene was identified by seminested PCR. For the detection of point mutations in the gene, RFLP was performed, using the enzymes HhaI that detects the T2717C mutation and MboII that identifies the A2142C / G mutation. RESULTS: a total of 45 patients were positive for Helicobacter pylori, which corresponds to 59.2%. The T2717C mutation analyzed with the HhaI enzyme was present in 2.2% of the study sample, no positive results were obtained for the MboII enzyme. CONCLUSIONS: the 23S rRNA gene of Helicobacter pylori was identified through Seminested PCR, PCR-RFLP is a reliable method to detect the presence of mutations causing resistance to antibiotics, useful before choosing the eradication treatment against Helicobacter pylori infections.

INTRODUÇÃO: um dos principais fatores que influenciam no tratamento para erradicação do Helicobacter pylori é a resistência aos antibióticos, que difere entre países e até mesmo regiões de um país. A claritromicina está entre os antibióticos mais amplamente utilizados para o tratamento de infecções.O gene 23S rRNA demonstrou estar envolvido na resistência a esse antibiótico, como resultado de mutações pontuais. OBJETIVO: detectar as mutações presentes no gene 23S rRNA que codificam resistência à claritromicina no Helicobacter pylori, por meio de um método não invasivo e rápido. MATERIAIS E MÉTODOS: a partir de amostras de fezes de 76 pacientes com sintomas gastrointestinais associados à bactéria, o DNA bacteriano foi isolado e purificado, o gene 23S rRNA foi identificado por PCR seminestado. Para a detecção de mutações pontuais no gene, foi realizado RFLP, utilizando as enzimas HhaI que detecta a mutação T2717C e MboII que identifica a mutação A2142C / G. RESULTADOS: um total de 45 pacientes foram positivos para Helicobacter pylori, o que corresponde a 59,2%. A mutação T2717C analisada com a enzima HhaI estava presente em 2,2% da amostra do estudo, nenhum resultado positivo foi obtido para a enzima MboII. CONCLUSÕES: por meio da PCR seminestada, foi identificado o gene rRNA 23S do Helicobacter pylori, o PCR-RFLP é um método confiável para detectar a presença de mutações que causam resistência a antibióticos, útil antes de escolher o tratamento de erradicação contra infecções por Helicobacter pylori.